抗Sm抗體是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）高度特異的診斷標(biāo)志物，抗Sm抗體只見于SLE患者。采用超敏CLISA技術(shù)，在特異性99%前提下，提高抗Sm抗體檢測SLE的靈敏度從30%到70%。

研究背景

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種以存在自身抗體為特征的自身免疫性疾病，臨床表現(xiàn)多樣，可累及一個或多個器官。依據(jù)《2020中國系統(tǒng)性紅斑狼瘡診療指南》，全球SLE患病率為0-241/10萬，中國大陸地區(qū)患病率約為30-70/10萬，男女患病比為1:10-12。

Smith抗原是非組蛋白核蛋白抗原，由不同蛋白質(zhì)與含鳥苷十分豐富的小核 RNAs（即UsnRNAs）形成核內(nèi)小核糖體蛋白（即 snRNP）。抗Smith抗體（簡稱“Sm自抗”）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡標(biāo)志性抗體，參與疾病的致病過程，存在于早期SLE、不典型 SLE 或經(jīng)治療SLE患者，不隨病情緩解及治療改變。Sm自抗診斷SLE特異性高達(dá)99%-100%，但敏感性僅約25%。Sm自抗檢測陰性不能排除SLE，評估SLE疾病活動性需要監(jiān)測Sm抗體滴度，目前Sm抗體傳統(tǒng)免疫方法檢測靈敏度不夠，需提升Sm自抗檢測靈敏度。

Smith自抗CLISA檢測試劑盒操作流程

第一步：間接法捕獲血清樣本中smith抗體。smith偶聯(lián)磁珠首先與樣本（5μL）孵育結(jié)合抗smith抗體，并與生物素標(biāo)記鼠抗人IgG抗體孵育形成免疫復(fù)合物。

第二步：激發(fā)RNA轉(zhuǎn)錄。鏈霉親和素-dsDNA探針與生物素-抗人IgG抗體結(jié)合。dsDNA探針數(shù)量與smith抗體滴度相關(guān)。加入轉(zhuǎn)錄工作液，T7 RNA聚合酶以dsDNA為模板合成RNA，得到激發(fā)RNA產(chǎn)物。（前2步可以在磁微粒化學(xué)發(fā)光儀中進(jìn)行全自動操作）

第三步：Cas13a熒光信號檢測。Cas13a/crRNA特異性識別轉(zhuǎn)錄RNA，激活Cas13a反式切割活性，快速切割RNA熒光探針，釋放熒光基團(tuán)，產(chǎn)生熒光信號。借助熒光測定儀，熒光信號達(dá)到閾值時間ΔT與樣本中自身抗體的濃度成比例，依據(jù)ΔT與抗體滴度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本中smith 抗體滴度。

圖1. 檢測原理示意圖

主要試劑組分

試劑盒檢測性能

ü 反應(yīng)時間：3小時。(免疫反應(yīng)0.5小時，轉(zhuǎn)錄反應(yīng)1小時，Cas熒光信號檢測0.5小時。

ü 線性范圍：50fg/mL~5ng/mL